질문내용
SDS-PAGE의 전체적인 ‘실험 과정’이 어떻게 되나요?
질문답변
1. 샘플 준비 : 연구자는 분리하고자 하는 단백질 샘플을 준비합니다. 이 샘플은 일반적으로 실험 대상인 단백질이 포함된 세포 추출물이나 정제된 단백질 시약입니다.
2. 겔 제작 : SDS-PAGE 겔은 두 개의 부분으로 이루어져 있습니다. 농도가 높은 아크릴아마이드 겔인 스택킹 겔(stacking
gel)과 농도가 낮은 겔인 리졸빙 겔(resolving gel)입니다. 겔을 제작하기 위해 아크릴아마이드와 전기적으로
활성화된 장미산으로 겔을 고형화시킵니다.
3. 겔 로딩 : 제작된 겔은 전기영동 챔버에 넣어줍니다. 겔에는 홀이 형성되어 있고, 이 홀에 샘플을 적재합니다.
4. 전기영동 : 전기영동 챔버에 전기를 인가하여 단백질이 겔을 통해 이동하게 합니다. SDS-PAGE에서는 음극(-)쪽으로 단백질이 이동하게 됩니다. 전기를 통해 이동하는 동안 단백질은 크기에 따라 겔 내에서 분리됩니다.
5. 염색 및 시각화 : 전기영동이 완료되면 겔은 염색된 후 시각화됩니다. 일반적으로 쿠마신 블루 또는 실버 염색이 사용되며, 단백질 밴드가 형성되어 나타납니다. 시각화된 겔은 이미지로 기록되거나 단백질 밴드의 밀도를 측정하는 등의 분석에 사용될 수 있습니다.